案例一：DSPE-PEG2000-R8的合成（多肽），氯仿/甲醇混合溶剂作为反应溶剂
1.将DSPE-PEG2000-Mal（10mg）溶于氯仿（4mL）中，加入三乙胺（2μL）。
2.将Cys-R8（DSPE-PEG2000-Mal/Cys-R8的摩尔比＝1/1.5）溶解在甲醇（2mL）中。
3.在氮气保护下，将Cys-R8的甲醇溶液加入DSPE-PEG2000-Mal的氯仿溶液中，在25℃的黑暗中轻轻搅拌24小时。
4.残留物用氯仿再溶解，溶液在水中透析以纯化产物。
5.将纯化的溶液冻干以收集DSPE-PEG2000-R8。
6.质谱和核磁共振波谱证实了DSPE-PEG2000-R8的存在
需要注意的是：不同的多肽溶解性差异较大，多肽不溶氯仿，一般溶于甲醇、DMSO、DMF、二氧六环等溶剂，该反应一定要注意反应溶剂的选择，确保多肽和材料都能够完全溶解。另外需要注意多肽和材料的投料量。如果监测反应是否发生的话，可以用液相监测多肽在反应 0 小时和反应一段时间后在溶液中的含量差异。另外，最后采用透析法除去未反应的多肽。
案例二：先做脂质体，再连接多肽，在水相中反应
Lipo-Dox和AP-1标记的Lipo-Dox：Lipo-Dox的制备使用溶剂注射法加上远程加载程序。简言之，将氢化大豆1-α-磷脂酰胆碱（95.8 mg）、胆固醇（31.9 mg）和1，2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基（聚乙二醇）-2000]（DSPE-PEG2000，31.9 mg）在60℃下溶解并充分混合在1 ml无水乙醇中。然后将脂质和乙醇混合物注入250mM硫酸铵的9ml溶液中，并在60℃下搅拌1小时。然后将该混合物通过孔径为0.4、0.2、0.1和0.05μm的聚碳酸酯膜连续挤压五次，在60℃下用高压挤压设备生产出小脂质体。然后将脂质体悬浮液在含有5 mM NaCl的大量10%蔗糖中透析5次，以去除未包裹的硫酸铵和乙醇。透析之后，将脂质体悬浮液置于50 ml的玻璃瓶中，再置于60°C水浴中与Dox混合，在10%蔗糖溶液中使Dox最终浓度为2 mg/ml。将瓶子在60°C的水浴中间歇摇动1小时，然后立即冷却到4°C，最终产出lipo-dox。
由于AP-1肽（CRKRLDRNC）的每个胱氨酸上都存在巯基，因此可以通过巯基-马来酰亚胺反应将AP-1偶联到脂质体上。简言之，通过以2:1的摩尔比，将AP-1添加到DSPE-PEG2000-MAL胶束溶液中，并在4°C下混合过夜，将AP-1肽与1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[马来酰亚胺（聚乙二醇）-2000]（DSPE-PEG 2000-MAL）偶联。用5，5′-二硫代二-（2-硝基苯甲酸）（Ellman试剂）在420nm处测量游离的巯基基团，以确认反应后大部分AP-1与DSPE-PEG2000-MAL偶联。将AP-1标记的DSPE-PEG2000以总脂质组分的1.5%摩尔比转移到预成型的Lipo-Dox中，并在60°C下孵育1小时以获得AP-1标记的Lipo Dox。
需要注意的是：先做含有 DSPE-PEG2000-MAL 的脂质体，再在水溶液中连接多肽，该操作可能存在反应率低的问题。该方法中采用 Ellman's reagent 测定巯基的含量来判断多肽的反应程度。
综上所述，DSPE-PEG-MAL 偶联反应建议在有机溶剂中进行。需要注意偶联物中-SH 的空间位阻（如多肽的分子量过大会影响 MAL 的连接效率，导致反应率过低）。在水溶液中反应，控制好反应溶液的 pH 值（推荐中性）和反应时间，避免因 MAL 基团的水解反应导致偶联反应失败。
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